體積,、電導(dǎo),、激光散射法(VCS)
這是Beckman-Coulter公司生產(chǎn)的血細胞分析儀所采用的經(jīng)典分析方法,,它集三種物理學(xué)檢測技術(shù)于一體,,在細胞處于自然原始的狀態(tài)下對其進行多參數(shù)分析,。該方法也稱為體積,、電導(dǎo),、激光散射血細胞分析法,。此技術(shù)采用在標本中首先加入紅細胞溶血劑溶解掉紅細胞,,然后加入穩(wěn)定劑來中和紅細胞溶解劑的作用,,使白細胞表面、胞漿和細胞體積保持穩(wěn)定不變,。然后應(yīng)用鞘流技術(shù)將細胞推進到流動細胞計數(shù)池(Flowcell)中,,接受儀器VCS三種技術(shù)的檢測。
V代表體積(Volume)測量法,,是血液細胞分析儀檢測方法采用經(jīng)典的庫爾特專利技術(shù),,用低頻電流準確分析細胞體積。體積是區(qū)分白細胞亞群的一個重要的參數(shù),,它可有效區(qū)分體積大小差異顯著的淋巴細胞和單核細胞,。
C代表高頻電導(dǎo)性(Conductivity),采用高頻電磁探針原理測量細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)間的差異,,也是該公司的專利技術(shù),。細胞膜對高頻電流具有傳導(dǎo)性,當電流通過細胞時,,細胞核的化學(xué)組份可使電流的傳導(dǎo)性產(chǎn)生變化,,其變化量可以反映出細胞內(nèi)含物的信息。該參數(shù)可用來區(qū)分體積相近而內(nèi)部性質(zhì)不同的細胞群體,如淋巴細胞和嗜堿性粒細胞,,由于它們的細胞核特性不同而在傳導(dǎo)性參數(shù)上有所區(qū)別,。
S代表激光散射(Scatter)測量技術(shù),采用氦氖激光源發(fā)出的單色激光掃描每個細胞,,收集細胞在10°~70°角度內(nèi)出現(xiàn)的散射光 (MALS)信號,。該激光束可穿透細胞,探測細胞內(nèi)核分葉狀況和胞漿中的顆粒情況,,提供有關(guān)細胞顆粒性的信息,,可以區(qū)分出顆粒特性不同的細胞群體。例如細胞內(nèi)顆粒粗的要比顆粒細的散射光更強,,因此可以用于區(qū)分粒細胞中的嗜中性,、嗜酸性和嗜堿性三種細胞。
電阻抗,、射頻與細胞化學(xué)聯(lián)合檢測技術(shù)
典型機型如SysmexSE-9000/SE-9500/XE-2100等,。這類儀器共有四個不同的檢測系統(tǒng),,將標本用特殊細胞染色技術(shù)處理后再應(yīng)用RF和DC技術(shù)對白細胞進行分類和計數(shù),。其共采用如下四個檢測系統(tǒng):
嗜酸性粒細胞檢測系統(tǒng):該系統(tǒng)是利用電阻抗方式計數(shù)。血液經(jīng)分血器分血后部分與嗜酸性粒細胞計數(shù)溶血劑混合,,特異的溶血劑使嗜酸性粒細胞以外的所有細胞均溶解或萎縮,,這種含完整嗜酸性粒細胞的液體經(jīng)阻抗電路計數(shù)。
嗜堿性粒細胞系統(tǒng):該系統(tǒng)檢測原理與嗜酸性粒細胞相同,,不同的是其溶血劑只能保留血液中的嗜堿性粒細胞,。
淋巴、單核,、粒細胞(中性粒細胞,、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞)檢測系統(tǒng):該系統(tǒng)采用電阻抗與射頻聯(lián)合檢測方式,,使用作用較溫和的溶血劑,,對核及細胞型態(tài)影響不大。在內(nèi)外電極上存在直流和高頻兩個發(fā)射器,。由于直流電不能達到細胞質(zhì)及核質(zhì),,而射頻電能透入胞內(nèi)測量核大小和顆粒多少,因此這兩種不同的脈沖信號的個數(shù)及高低綜合反映了細胞數(shù)量,、大?。―C)和核及顆粒密度(RF)。由于淋巴細胞,、單核細胞及粒細胞的大小,、細胞質(zhì)含量、核形態(tài)與密度均有較大差異,,故可通過掃描得出其比例,。
幼稚細胞檢測系統(tǒng):該系統(tǒng)也是利用電阻抗方式計數(shù),。其原理血液細胞分析儀檢測方法是由于幼稚細胞上的脂質(zhì)較成熟細胞少,在細胞懸液中加入硫化氨基酸后,,由于脂質(zhì)占位不同,,結(jié)合在幼稚細胞上的硫化氨基酸較成熟細胞多,且對溶血劑有抵抗作用,,故能保持幼稚細胞的形態(tài)完整而溶解成熟細胞,,即可通過阻抗法檢測。
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